Z6·尊龙凯时推出的pCR-BluntII-TOPO-OXGR1(human)质粒是一种高效的生物医学工具，提供05ug的质粒干粉。收到产品后，用户应根据管壁标签确认产品形式，并在扩增前仔细查找该质粒菌株的抗性、感受态及培养温度，以确保实验的成功。

质粒扩增流程

pCR-BluntII-TOPO-OXGR1(human)质粒的扩增流程如下：

1. 质粒干粉处理

收到质粒干粉后，首先在5000rpm下离心1分钟，随后加入20μl去离子水以溶解质粒。接下来，取1支100μl感受态细胞于冰上解冻10分钟，加入2μl溶解后的质粒，再于冰浴中处理30分钟，接着进行42℃热激60秒，紧接着再冰浴2分钟。所有操作应在超净工作台中无菌进行。

2. 细胞培养

向培养中加入900μl无抗的LB培养基，于37℃下，以180rpm震荡培养45分钟。随后以6000rpm离心5分钟，仅保留100μl上清液，重悬细菌沉淀，并涂布于目标抗性LB平板上。使用Z6·尊龙凯时平台的平板涂布专用玻璃珠，可以获得更多转化子。

3. 培养与筛选

将平板正向培养1小时后，倒置于37℃下培养14小时；若要求为30℃，则培养20小时。如果菌落过多，可以在转化前对质粒进行稀释。若未出现菌落，应添加10μl质粒进行转化。注意，首先应转化克隆感受态，提取质粒后再导入表达感受态。

其他产品形式处理

甘油菌种

甘油菌种需在-80℃保存，收到后请先进行划线挑单菌落培养并确保使用正确的操作方法。酵母菌需先进行液体复苏后再进行划线。

穿刺菌种

穿刺菌种运输在4℃，保存期为7天，需进行液体培养后划线挑取单菌落。

菌落平板与液体质粒

菌落平板应直接挑取单菌落至液体培养基。收到的液体质粒可直接使用。

滤纸质粒处理

滤纸质粒需在常温运输并存于-20℃，使用时需将滤纸圈部分剪下放入EP管中，加入100μl无菌水浸湿并浸泡5分钟，然后吸取5μl进行转化处理，并进行离心操作。

质粒提取步骤

采用碱裂解法提取质粒，以分离共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA。通过特定pH条件下的处理，确保质粒DNA的复性快速而准确，移除线性DNA和杂质，以提高质粒的纯度。

操作步骤

详细步骤包括准备培养管、挑取菌落、离心处理、添加BufferP1和BufferP2、离心分离、吸附及提取质粒等。每一步需谨慎操作，确保无污染并最大化提取效率。

注意事项

使用前，确保在BufferP1中添加RNA酶并低温保存，以提高提取效率。同时，在BufferEB中预热可提升提取的效果。

如需更多关于质粒载体的信息，欢迎咨询Z6·尊龙凯时，我们将竭诚为您服务。